公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Phospho-NMDAR2A (Tyr1246)： 0酸化谷酸受體2A抗體 F11 Others Human 人 F11 / FXI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0103Hep G2(人肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠羧肽酶B1(CPB1)ELISA試劑盒 IL-1sR II (Human soluble interleukin-1 receptor II )  人白介素1可溶性受體Ⅱ 96T

NKG2D： NK細(xì)胞受體2D抗體 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]

RTE(大鼠氣管上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 A375(人類惡性黑色素瘤) 大鼠羧肽酶A3(CPA3)ELISA試劑盒 RBP-4  大鼠結(jié)合蛋白4 96T

NRF-1： 核呼吸因子-1抗體 人肝癌細(xì)胞;Hep G2 [HepG2]

人結(jié)直腸癌細(xì)胞;T84 人白介素17(IL-17)ELISA 試劑盒 ORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原 0.5mg

IFI44： 干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人白介素16(IL-16)ELISA 試劑盒 OTR(oxytocin receptor)受體 0.5mg

ITPR3： 5-三0酸肌醇受體3抗體 人腦膜細(xì)胞HMC

CCL1 Protein Mouse 重組小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 人白介素15(IL-15)ELISA 試劑盒 OXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽) 0.5mg

MDA-MB-436人乳腺癌細(xì)胞RCCD1： RCCD1蛋白抗體 tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3

CL-0328CEM/C1(人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠不對(duì)稱二甲基精酸(ADMA)ELISA試劑盒 MPIF-1/CCL23(Human Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 1)  人骨髓抑制因子1 96T

phospho-RAD9(Ser328)： 0酸化細(xì)胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體 GB Others Cytomegalovirus/CMV 巨細(xì)胞病毒 HCMV gB ECD 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人毛細(xì)胞總RNAHHDPC NA 大鼠補(bǔ)體因子H(CFH)ELISA試劑盒 ADP(Human adiponectin)  人脂聯(lián)素 96T

phospho-REC8(Ser251)： 0酸化減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7