公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MARK4： 絲酸/蘇酸蛋白激酶MARK4抗體 SERPING1 Others Human 人 SERPING1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

6-10B, 人鼻咽癌細(xì)胞系 大鼠血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)ELISA試劑盒 ANG-2 (Rabbit Angiopoietin 2)  兔血管生成素2 96T

MEP1A： 苯肽水解酶抗體 小鼠肝癌瘤株;H22

MDA-MB-175VII(人導(dǎo)管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 BRL 3A(大鼠肝細(xì)胞) 大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWFcp)ELISA試劑盒 Plant growth hormone,GH  植物生長激素 96T

phospho-MEK2(Thr394)： 0酸化原活化蛋白激酶激酶2抗體 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7

Balb/c小鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Balb/c mouse bone marrow mesenchymal stem cells 人核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA 試劑盒 ChRM3 peptide 毒蕈堿型乙酰受體M3抗原 0.5mg

HS6ST1： 乙酰肝素6腦苷脂轉(zhuǎn)酶1抗體 小耳豬腎細(xì)胞;SEPfk 癌細(xì)胞，MDA-MB-468細(xì)胞 WK256細(xì)胞，大鼠肉瘤細(xì)胞

CD302 Others Rat 大鼠 CD302 / CLEC13A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒 CK18(Cytokeratin 18) 細(xì)胞角蛋白18(多肽) 0.5mg

Humanin： 神經(jīng)保護(hù)肽HN抗體 CL-0186PIEC(豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 )5×106cells/瓶×2

B16細(xì)胞，人黑色素瘤細(xì)胞 植物乳桿菌 白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2 人核糖核酸酶(RNASE)ELISA 試劑盒 CK18 peptide 細(xì)胞角蛋白18多肽抗原 0.5mg

J.gamma1人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞M14 人黑色素瘤細(xì)胞 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 EG-VEGF  大鼠內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子 96T

PIRH2： 泛素連接酶抗體 NCI-H520[H520]細(xì)胞，人肺癌細(xì)胞 人膀胱癌細(xì)胞,EJ細(xì)胞 人心肌細(xì)胞HCM

CD300A Others Mouse 小鼠 CD300A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠高遷移率族蛋白1(HMGB1)ELISA試劑盒 Human echinococcus antibody IgG  人包蟲抗體 CM-R061大鼠腎動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

MDA-MB-468人癌細(xì)胞 Human breast cancer cell line MDA-MB-468 L-15+10%FBS 大鼠高遷移率族蛋白1(HMG1)ELISA試劑盒 1,3- BetaD-Glu  大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶 96T

PANK4： 泛酸激酶4抗體 MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)